邓沁;郭春宝;目的探讨双歧杆菌对坏死性小肠结肠炎(NEC)新生小鼠肠组织的保护作用。方法60只新生8日龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、坏死性小肠结肠炎(NEC)组、双歧杆菌干预(NEC+BIF)组,每组20只,建模3 d后处死。HE染色观察新生小鼠肠组织病理形态学变化;Western blotting检测新生小鼠肠组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达情况;比色法检测肠组织eNOS活性及一氧化氮(NO)、超氧阴离子(■)含量;实时荧光定量PCR检测肠组织白介素6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)的m RNA表达情况;ELISA检测肠组织IL-6、IL-1β蛋白表达情况。结果3组新生小鼠肠组织eNOS蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,NEC组新生小鼠肠组织e NOS活性降低,NO含量减少,■含量增加,IL-6、IL-1β的m RNA及蛋白表达均明显增加(P<0.05);与NEC组相比,NEC+BIF组新生小鼠建模3 d后体重明显增加,肠上皮损伤明显减轻,肠组织eNOS活性增强,■含量明显减少,IL-6蛋白表达减少,IL-1β的mRNA及蛋白表达均减少(P<0.05),但NO含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论双歧杆菌可减轻NEC新生小鼠肠组织损伤,其机制可能与肠组织eNOS活性增强有关。
2020年01期 v.45 49-54页 [查看摘要][在线阅读][下载 1603K] [下载次数:321 ] |[引用频次:12 ] |[阅读次数:174 ] 王小龙;胡成芳;唐璐瑶;李艺;官涛;黄云剑;目的探讨高糖条件下高表达ARNO对人肾小球内皮细胞(HRGEC)通透性的影响及其作用机制。方法体外培养HRGEC,分别观察不同时间梯度(15、30、45和60 min)和浓度梯度(10、20、30和40 mmol/L)高糖作用对ARNO蛋白表达和内皮细胞通透性的影响。分别采用ARNOsiRNA和Arf6siRNA重组慢病毒载体感染HRGEC,获得沉默ARNO和Arf6的HRGEC细胞株,观察ARNO和Arf6基因沉默对内皮细胞通透性的影响。结果时间梯度实验中,与高糖对照组相比,高糖15、30、45、60 min组HRGEC ARNO表达明显升高(分别为0.670±0.051、0.960±0.106、0.716±0.026、0.531±0.030vs.0.242±0.029),差异有统计学意义(P<0.05),与高糖15 min组相比,高糖30 min组ARNO表达升高(P<0.05),与高糖30min组相比,高糖45 min组ARNO表达回落(P<0.05),与高糖45 min组相比,高糖60 min组ARNO表达降低(P<0.05)。与高糖对照组相比,高糖15、30、45、60 min组内皮细胞通透性明显增加(分别为1.196±0.004、1.399±0.012、1.301±0.052、1.184±0.030vs.1.000),差异有统计学意义(P<0.05),与高糖15 min组相比,高糖30 min组通透性增加(P<0.05),与高糖30 min组相比,高糖45 min组通透性下降(P<0.05),与高糖45 min组相比,高糖60 min组通透性下降(P<0.05)。浓度梯度实验中,与正常糖组相比,高糖20、30、40 mmol/L组HRGEC ARNO表达明显升高(分别为0.632±0.031、0.927±0.041、1.183±0.098 vs. 0.169±0.033),差异有统计学意义(P<0.05),且随高糖浓度增加,ARNO表达呈递增趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。与正常糖组相比,高糖10、20、30、40 mmol/L组内皮细胞通透性明显增加(分别为1.147±0.015、1.237±0.023、1.351±0.015、1.444±0.019 vs. 1.000),差异有统计学意义(P<0.05),且随高糖浓度增加,内皮细胞通透性呈递增趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。转染慢病毒后,与正常糖未转染组及正常糖空载体组相比,正常糖ARNO siRNA组ARNO mRNA转录明显降低(0.255±0.056 vs.1.000、1.183±0.297),ARNO蛋白表达明显降低(0.088±0.005vs.0.246±0.011、0.237±0.009);正常糖Arf6siRNA组Arf6 mRNA转录明显降低(0.314±0.090 vs. 1.000、1.140±0.236),Arf6蛋白表达明显降低(0.690±0.012 vs. 0.917±0.009、0.919±0.009),差异均有统计学意义(P<0.05)。沉默内皮ARNO后,与高糖未转染组及高糖空载体组相比,高糖ARNO siRNA组ARNO蛋白表达明显降低(0.572±0.021vs.0.915±0.005、0.916±0.012),Arf6活性明显降低(0.263±0.007vs.0.484±0.014、0.490±0.008),细胞通透性也明显降低(0.718±0.017vs.1.000、0.978±0.040),差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,沉默内皮Arf6后,与高糖未转染组及高糖空载体组相比,高糖Arf6siRNA组Arf6蛋白表达明显降低(0.673±0.015 vs. 0.932±0.020、0.899±0.022),内皮细胞通透性也明显降低(0.768±0.050 vs. 1.000、0.978±0.040),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高糖诱导的HRGEC高通透性与ARNO/Arf6信号活化有关,抑制ARNO的表达及Arf6活性可抑制糖尿病肾病肾小球内皮的高通透性。
2020年01期 v.45 55-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 1408K] [下载次数:257 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:216 ] 陈怿;邱嘉玲;丁程佳;陈加弟;刘志峰;童华生;江东新;目的探讨单核-巨噬细胞髓样细胞触发受体-1(TREM-1)对重症中暑大鼠急性肺损伤的作用及其可能机制。方法将40只大鼠随机分为对照组(Con组)、中暑组(HS组)、低剂量抑制剂组(LD组)和高剂量抑制剂组(HD组),每组10只。采用高温高湿[温度(40±2)℃,湿度65%±5%]打击60 min制备中暑大鼠模型,LD组、HD组大鼠分别于造模前2 h尾静脉注射50 mg/kg、100 mg/kg LP-17试剂。采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定体循环血及肺组织匀浆上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的表达水平;流式细胞术检测体循环血中单核细胞TREM-1的表达;HE染色观察肺组织病理学变化;免疫组化法检测肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达;Westernblotting检测肺组织TREM-1和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)蛋白的表达。结果抑制单核-巨噬细胞TREM-1活性可抑制中暑大鼠体循环血和肺组织中TNF-α、IL-6和IL-1β的释放(P<0.01),减少外周血中单核细胞TREM-1的异常表达(P<0.01),减轻肺组织损伤(P<0.01),下调肺组织iNOS、TREM-1和MCP-1蛋白的表达(P<0.01)。结论抑制单核-巨噬细胞TREM-1的活性可通过下调循环血和肺组织中TREM-1的表达而减轻炎性损伤,缓解氧化应激反应,抑制趋化因子释放,进而减轻重症中暑大鼠的急性肺损伤。
2020年01期 v.45 62-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 1590K] [下载次数:374 ] |[引用频次:11 ] |[阅读次数:320 ] 梁冰;方洁;目的研究靶向沉默ANX A3对大鼠吗啡镇痛效能的作用及其可能机制。方法雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射15μg吗啡建立慢性吗啡镇痛耐受模型。将30只大鼠随机分为吗啡组、阴性对照组和ANXA3 siRNA组。实验第1、3、5和7天,通过测定各组大鼠后爪的热缩足反射潜伏期(PWL)计算最大可能镇痛效应百分数(%MPE)。第7天行为学测试结束后麻醉并处死大鼠,收集各组大鼠脊髓腰膨大,采用Western blotting及RT-PCR测定ANXA3mRNA及蛋白表达水平。采用RT-PCR和ELISA试剂盒测定肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和IL-6的mRNA及蛋白表达水平。采用Western blotting评价细胞外信号调节激酶(ERK)和c-Jun氨基端激酶(JNK)的磷酸化水平。结果注射吗啡后,阴性对照组%MPE与吗啡组比较无明显差异。注射吗啡第3、5、7天,ANXA3 siRNA组%MPE均明显高于阴性对照组(78.27%±8.50%vs. 71.75%±5.98%、64.37%±25.94%vs. 43.56%±2.69%、39.96%±3.27%vs.13.81%±1.25%,P<0.05)。与吗啡组比较,阴性对照组ANXA3mRNA和蛋白相对表达水平无明显差异。ANXA3siRNA组的ANXA3 mRNA和蛋白相对表达水平均低于阴性对照组(0.47±0.09 vs. 1.14±0.08、0.38±0.05 vs. 1.15±0.21,P <0. 0 5)。与吗啡组比较,阴性对照组T N F-α、 I L-1β和I L-6蛋白浓度无明显差异。A N X A 3s i R N A组的T N F-α、IL-1β和IL-6蛋白浓度均低于阴性对照组[(210.15±19.86) pg/gvs.(394.93±54.18) pg/g、(313.42±42.19) pg/gvs.(534.26±49.78) pg/g、(434.68±49.15) pg/gvs.(794.92±98.32) pg/g,P<0.05]。与吗啡组比较,阴性对照组p-ERK和p-JNK蛋白相对表达水平无明显差异。ANXA3 siRNA组p-ERK和p-JNK蛋白相对表达水平明显均低于阴性对照组(0.55±0.04vs.1.07±0.12、0.68±0.07vs.1.15±0.04,P<0.05)。结论靶向沉默ANXA3可能通过调控ERK和JNK的磷酸化水平增强吗啡的镇痛效能并减轻炎症反应。
2020年01期 v.45 68-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K] [下载次数:168 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:195 ]