解放军医学杂志

2019, v.44(12) 1018-1023

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鞘氨醇激酶-1对热联合内毒素打击小鼠肺微血管内皮细胞通透性的影响
Effect of SphK1 on the permeability of mice lung microvascular endothelial cells induced by double insults of heat and endotoxin

易万华;古正涛;文强;苏磊;

摘要(Abstract):

目的探讨鞘氨醇激酶-1(SphK1)对热联合内毒素(LPS)打击小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)通透性的影响。方法分离培养并鉴定PMVECs,建立热联合LPS双重打击PMVECs模型。将PMVECs细胞分为对照组、热打击组(HS组)、内毒素打击组(LPS组)及热联合内毒素打击组(HS+LPS组),采用Westernblotting检测各组细胞2种鞘氨醇激酶亚型(SphK1/2)、3种1-磷酸鞘氨醇膜受体(S1PR1/2/3),以及相关紧密连接蛋白如闭合蛋白(occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达,荧光定量PCR检测SphK及S1PRmRNA的表达。将细胞分为对照组、HS+LPS组及DMS预处理热联合内毒素打击组(HS+LPS+DMS组),采用SphK活性检测试剂盒检测酶活性,CCK-8试剂盒检测细胞活力,EVOM跨膜电阻测量仪检测细胞跨上皮电阻(TEER),并观察特异性抑制SphK1表达对细胞活力和通透性的影响。结果热联合内毒素打击后,细胞SphK1和S1PR3蛋白、mRNA表达及酶活性水平与正常对照组比较明显上升(P<0.01),细胞活力、TEER值、紧密连接蛋白(ZO-1、occludin)表达较对照组下降;采用SphK1特异性抑制剂DMS预处理PMVECs细胞后,明显提升了细胞活力[63.3%±7.1%vs. 41.3%±4.5%,P<0.05]、TEER值[(154.3±16.0)(Ω·cm2)vs.(84.7±9.6)(Ω·cm2)],以及紧密连接蛋白的表达(P<0.05)。结论 SphK1的激活可以促进热联合LPS打击小鼠PMVECs通透性的增加,主要参与的下游1-磷酸鞘氨醇(S1P)细胞膜表面受体可能为S1PR3,特异性抑制SphK1表达可减轻PMVECs损伤。

关键词(KeyWords): 重症中暑;肺损伤;SphK1;通透性

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 军事医学创新工程专项(17CXZ008);; 广东省自然科学基金(2014A 030313599)~~

作者(Author): 易万华;古正涛;文强;苏磊;

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